ラベルフリーLC-MS分析法を用いて、ヒト母乳中のN型およびO型糖鎖の組成を調べました。200検体の日本人ドナーの母乳（産後1-2ヶ月）中のN型糖鎖16種類、O型糖鎖12種類をLC-MSで相対定量し、同時に11種類のHMOの濃度をHPAE-PAD法を用いて定量しました。定量データのクラスター解析から、O型糖鎖およびいくつかのHMOはフコースの有無によって分類される一方で、N型糖鎖はそれらとは異なるグループに分類されることが明らかになりました。コースを持つO型糖鎖およびHMOは、非分泌型の母乳よりも分泌型の母乳に多く含まれていました。このように、ドナーの分泌型の状態は母乳中のHMOとO型糖鎖の組成と濃度に影響を及ぼしましたが、N型糖鎖には影響を及ぼさないことが明らかとなりました。

O型糖鎖分析サンプル調製には住友ベークライト製 EZGlyco® O-Glycan Prep Kit を使用しました。標品のフェツイン溶液（5 μL）またはヒト母乳（5 μL）をキット同梱の Glycan Release Reagent（7.5 μL）と混合し、50°C で20分間インキュベートしました。その後、450 nmol/L マルトヘキサオース溶液（107.5 μL）を加え、脱塩カラム Vivaspin 500を用いて15,000×gで10分間遠心しタンパク質を除去し、回収した糖鎖溶液をアセトニトリルで2倍希釈し、LC-MS測定に供しました。